一、凝膠凈化原理

　　凝膠凈化是依靠分子量篩選效應(yīng)來(lái)進(jìn)行蛋白質(zhì)純化的。在凝膠中，由于其空間結(jié)構(gòu)和酸堿度等因素的影響，不同大小的蛋白質(zhì)會(huì)在凝膠孔道中移動(dòng)速度不同，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)分離的效果。

 

　　二、凝膠凈化儀主要由電泳槽、電源、恒溫裝置和收集系統(tǒng)等部分組成。其中電泳槽是核心的部件，它包含了凝膠制備和電泳兩個(gè)步驟。

　　1.凝膠制備

　　凝膠制備通常使用聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠。其中，聚丙烯酰胺凝膠是目前應(yīng)用廣泛的凝膠材料之一。在制備聚丙烯酰胺凝膠時(shí)，需要將單體丙烯酰胺、交聯(lián)劑N,N'-甲撐二丙烯酰胺和過(guò)硫酸銨等混合后進(jìn)行聚合反應(yīng)。通過(guò)控制單體與交聯(lián)劑的比例和加入過(guò)硫酸銨的量等因素，可以調(diào)節(jié)凝膠孔徑和網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)不同大小蛋白質(zhì)的篩選分離。

 

　　2.電泳

　　凝膠制備好后，就可以進(jìn)行電泳操作了。在電泳過(guò)程中，需要將樣品溶液注入凝膠上方的樣品槽中，并將電極插入兩端，接通電源。此時(shí)，電場(chǎng)作用下，帶電粒子（包括帶電的DNA、RNA或蛋白質(zhì)）會(huì)向電極方向移動(dòng)，根據(jù)其大小進(jìn)行分離。

 

　　三、凝膠凈化儀的優(yōu)點(diǎn)：

　　（1）具有高效性：能夠快速地將目標(biāo)蛋白質(zhì)從復(fù)雜混合物中分離出來(lái)。

 

　　（2）靈敏度高：能夠檢測(cè)到非常微小的蛋白質(zhì)量，并進(jìn)行準(zhǔn)確的分離。

 

　　（3）純度高：能夠?qū)⒛繕?biāo)蛋白質(zhì)從復(fù)雜混合物中高效地純化出來(lái)，并且不會(huì)受到其他成分的干擾。